Використання типових реакцій лігування 100-200нг векторної ДНК. 2. Інкубуйте реакцію при: кімнатній температурі протягом 3 годин, або 4°C протягом ночі, або 15°C протягом 4–18 годин.
Загальна концентрація вектора + вставка повинна бути між 1-10 мкг/мл для ефективної перев'язки. Вектор: рекомендовані молярні співвідношення вставок від 1:1 до 1:10 (типовим є 1:3).
Для успішної хімічної трансформації необхідно 50–100 мкл компетентних клітин і 1–10 нг ДНК рекомендовано. Якщо суміш для лігування використовується як джерело для трансформації ДНК (часто достатньо 1–5 мкл), очищення перед хімічною трансформацією, як правило, не потрібно.
Т4 ДНК-лігаза є білком із 487 залишків. Бактеріофаг Т4 має дволанцюговий геном приблизно 169 кб, що кодує 300 генів (Bullard and Bowater 2006).
Щоб провести судово-медичний аналіз ДНК, ДНК спочатку витягується із зразка. Просто один нанограм ДНК зазвичай є достатньою кількістю, щоб отримати достовірні дані.
близько 100 нг Ми рекомендуємо близько 100 нг загальної ДНК у стандартній реакції лігування. Використовуйте (посилання відкриється в новому вікні) калькулятор лігування, щоб легко кількісно визначити, скільки вектора та вставленої ДНК використовувати.