Також, на відміну від більшості супергероїв, у Людини-павука немає одного заклятого ворога, а три: версія Нормана Осборна про Зеленого Гобліна, версія Отто Октавіуса про Доктора Восьминога та версія Едді Брока про Венома, останні два з яких були подібним чином викуплені та зображені як антигерої; оскільки …
Зловісна шістка з'являється в Marvel's Spider-Man, що складається з Доктор Восьминіг, Електро, Носоріг, Скорпіон, Стерв'ятник і Містер Негатив.
Інші грізні вороги, з якими стикається Людина-павук протягом багатьох років, включають пам’ятні загрози, такі як Адріан Тумс, AKA Vulture, Max Dillon, AKA Electro, William Baker, AKA Sandman, Aleksei Sytsevich, AKA Rhino, Mac Gargan, AKA Scorpion, Wilson Fisk, AKA Kingpin , Герман Шульц, він же Шокер, і доктор Курт Коннорс, він же Ящірка.
Пізніше Доктор Восьминіг керує Ящіркою, щоб той міг приєднатися до нього, Electro, Rhino, Kraven the Hunter і Beetle як член зловісної шістки. Тоді як Щ.І.Т. Команда перемагає п’ятьох із шести лиходіїв, Коннорс тікає, а Людина-павук клянеться знайти й вилікувати його.
Вілсон Фіск можливо, він не має яскравих надздібностей, як деякі інші вороги Людини-павука, але він довів, що може протистояти одним із найжорсткіших вуличних героїв Marvel. Як «Кінгпін», Фіск неодноразово брав під свій контроль злочинний світ Нью-Йорка, хоча він навіть став мером міста.